由于 ELISA（酶聯(lián)免疫試驗）具有靈敏度較高、特異性好的特點，現(xiàn)在已經(jīng)被廣泛的使用，上海恒遠生物科技有限公司作為一家專業(yè)代理
和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準確可靠的必要條件。如不注意，就易出現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽性等現(xiàn)象。現(xiàn)在我們就將ELISA實驗操作中的注意事項列舉出來，請收好哦！
1.嚴重溶血，以HRP為標記的ELISA測定中，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性，催化底物顯色造成假陽性；混有紅細胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈；如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)；標本凝疑固不全，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋臼原，在ELSA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；采血試管冼滌不徹底、反復(fù)使用易交叉污染；塑料試管能嘬阼抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。
2.血清標本宜在新鮮時檢測，嚴重溶血標本禁用。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃，標，在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清lgG聚合，使間接法的試劑本底加深超過一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后，蛋臼質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勹并避免產(chǎn)生氣泡�；鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫�(yīng)先離心或過濾，澄凊后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存作多檢測，宜少量分裝冰存；使用一次性璵璃試管或真空管釆血管；并使用非抗凝標本，肝素抗凝血漿會增加OD值，可能與高濃度肝素具有強大的負電荷能吸附酶標記物不易洗脫有關(guān)；EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELsA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性；血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當?shù)拇倌齽?/div>
二、試劑的影響
ELISA試劑經(jīng)歷了從合成肽向基因工程抗原的過渡。由于歷史的原因，人們往往以反應(yīng)本底的好壞來衡量ELISA反應(yīng)試劑盒，因此有些廠家為了保持較好的本底采用了單片段基因工程抗原及合成肽包被，該類試劑盒的流行病學(xué)敏感度不夠，穩(wěn)定性也成問題。也有廠家堅持試劑盒高的流行病學(xué)敏感度科學(xué)地對待反應(yīng)結(jié)果�；蚬こ炭乖^合成肽抗原有無可比擬的優(yōu)越性，就 HCV-
ELISA試劑盒來講，代產(chǎn)品為合成肽抗原，主要是HC∨特異性抗原決定簇的肽片段；第二代產(chǎn)品包被的抗原既有基因工程抗原又有合成肽，只是當時的基因工程抗原不全，僅包括了HCV的核心區(qū)片段第三代產(chǎn)品基本上采用了基因工程抗原，而且這些抗原包括更多、更穩(wěn)定、純度更高的HCⅴ特異性抗原。第三代試劑的敏感度大大提高了�；蚬こ炭乖c合成肽抗原的區(qū)別如下:
基因工程抗原是抗原基因在質(zhì)粒載體中原核或真核表達的蛋白質(zhì)抗原，多以大腸桿菌或酵母菌為表達系統(tǒng)。該類抗原與合成肽相比具有以下特點。
1.分子量大。合成肽采用化學(xué)方法制備，由于工藝的局限，合成數(shù)量有限，只能達到數(shù)百個氨基酸；而利用基因工程制備的抗原，分子量更大。
2.穩(wěn)定性好。包被的抗原的穩(wěn)定性可使試劑盒的效期得到保證，早期以合成肽為包被抗原的試劑盒期只有3-4個月，采用基因工程抗原后效期大大延長了。
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