微生物為廣泛分布于自然界中的一群肉眼看不到的微小生物,包括細(xì)菌、螺旋體、立克次體、衣原體、支原體、放線菌、真菌、病毒等類,其結(jié)構(gòu)簡單,以單細(xì)胞、細(xì)胞群體或非細(xì)胞狀態(tài)存在,在提供營養(yǎng)物質(zhì)和適宜環(huán)境的條件下,一般都能獨(dú)立生活,迅速生長繁殖。為了避免微生物死亡、污染,保持其原有性狀基本穩(wěn)定,便于研究和使用,需要用到菌種保藏技術(shù)。菌種的保存主要是指通過降低細(xì)菌新陳代謝的速度, 使細(xì)菌的生命活動處于半yongjiu性休眠狀態(tài), 以達(dá)到changqi保藏的目的以及減少菌種的更新需求來降低實驗生產(chǎn)成本。微生物菌種的保存方法由于微生物種類的不同而略有差距,接下來給大家介紹一些常見的菌種保存的方法:
1.低溫冷凍保藏法
該方法適合大多數(shù)需要changqi保存的微生物,病毒等。原理為在超低溫環(huán)境下時,微生物代謝活動停止,一般溫度越低效果越好。使用凍存管對菌種進(jìn)行保存,同時需要保護(hù)劑,一般使用甘油、脫脂羊粉或者二甲亞砜等保護(hù)劑。講含有菌種的凍存管置于-60~-80℃冰箱中冷凍保存。
2.液體石蠟保藏法
液體石蠟保藏法適用于一些不能分解石蠟的菌類,例如酵母菌、芽孢桿菌屬、青霉屬、曲霉屬等,一些細(xì)菌和真菌并不適合用該方法進(jìn)行保存。液體石蠟法使用液體石蠟覆蓋,微生物代謝被抑制,菌種老化推遲。石蠟法可以防止氧氣進(jìn)入,使得需氧菌無法繼續(xù)生長,同時若培養(yǎng)基水分蒸發(fā),容易導(dǎo)致細(xì)菌死亡,石蠟法可防止培養(yǎng)基水分蒸發(fā),延長菌種保存時間。無菌條件下將滅菌的液體石蠟注入剛培養(yǎng)好的斜面培養(yǎng)物上,液面高出斜面頂端1cm~2cm,加膠塞并用固體石蠟封口,使菌種與空氣隔絕。將注人石蠟油的菌種斜面直立存放于低溫(4℃~6℃)干燥處或室溫下保存。
3.冷凍干燥保藏法
該方法適合大多數(shù)微生物的保存,但不適用于不產(chǎn)孢子的絲狀真菌。冷凍干燥保藏法是在低溫、干燥、缺氧條件下保藏菌種。即在低溫條件下快速地將菌種凍結(jié),使微生物保持完整,然后減壓抽直空使冰升華直至脫水干燥,并在直空狀態(tài)密封隔絕空氣,使微生物代謝活動停止,得以changqi保藏。按照一定配方配置保護(hù)劑加入安瓿管,然后再加入菌種制備成菌懸液。先將安瓿管進(jìn)行預(yù)凍存至-15~-20℃,然后用冷凍真空干燥機(jī)對安瓿管進(jìn)行干燥,并將安瓿管進(jìn)行熔封。(低溫避光保存)
4.沙土管保藏法
該方法適合用于產(chǎn)孢類放線菌、芽孢桿菌等的保存,不適合以菌絲發(fā)育為主的真菌和病原性真菌的保藏。使用細(xì)沙土創(chuàng)造干燥條件,使那些能夠產(chǎn)生孢子或芽孢的微生物在干燥環(huán)境中的代謝活動減緩,抑制其繁殖速度,且抵抗力強(qiáng)不易死亡。該方法能減少菌株突變,延長存活時間。將河、海沙用60目過篩,棄去大顆粒及雜質(zhì),再用80目過篩,去掉細(xì)沙。用吸鐵石吸去鐵質(zhì),放入容器中用10%鹽酸浸泡,如河沙中右機(jī)物較多可用20%鹽酸浸泡。24h后倒去鹽酸,用自來水浸泡數(shù)次至中性,將沙子烘于或曬干。另取未被污染的地表以下十壤用100日討篩,自來水洗至中性,烘干。按沙:土=2:1混合均勻,分裝人安瓿管或小試管中,高度為1cm左右,塞好棉塞,121℃高壓滅菌1~1.5h,或常壓間歇滅菌3次、每天每次16。在50℃以下烘干(溫度不宜過高,影響菌種性能),經(jīng)檢查無微生物生長方可使用。之后制備菌懸液并將菌懸液加入沙土管中。講含有菌懸液的沙土管放入真空干燥器中進(jìn)行真空干燥。使用火焰封融管口,存放于低溫(4℃~10℃)或常溫干燥處,定期檢查活力及雜菌情況。