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恒遠(yuǎn)生物|ELISA試劑盒變質(zhì)的原因是什么呢?

點(diǎn)擊次數(shù):12246   發(fā)布時(shí)間:2023/8/7 15:05:29

在ELISA實(shí)驗(yàn)中我們經(jīng)常會(huì)碰到試劑盒變質(zhì)的問題,是什么原因?qū)е铝薊LISA試劑盒的變質(zhì)呢?接下來(lái)我就和大家說(shuō)一說(shuō)導(dǎo)致ELISA試劑盒變質(zhì)的原因有哪些。
 
導(dǎo)致ELISA試劑盒變質(zhì)的原因主要分為七種:
 
1、方法學(xué)的影響
  ELISA測(cè)定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法,其中競(jìng)爭(zhēng)抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的不公平競(jìng)爭(zhēng)等因素的影響,結(jié)果重復(fù)性較差,質(zhì)量較難控制。
 
2、試劑因素
  不同批次的ELISA試劑在制作過(guò)程中很難bao證質(zhì)量一致,即使是通過(guò)批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)結(jié)果也會(huì)存在差異,因此必須選擇和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑,并bao證保存條件。 嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過(guò)程,并且能夠bao證結(jié)果的穩(wěn)定性;對(duì)于效期短、使用率低的試劑,應(yīng)當(dāng)小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。

3、樣本因素
  標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等,后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。
 
4、操作因素
       ELISA操作步驟復(fù)雜,操作不當(dāng)將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。
 
5、灰區(qū)的設(shè)置
  通常情況下,ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽(yáng)性”和“陰性”來(lái)報(bào)告結(jié)果,兩者間有一條分界線被稱為“陽(yáng)性判斷值”(cut-off value,CO值),這是定性免疫測(cè)定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。
 
6、標(biāo)本復(fù)查
        ELISA手工檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜,影響因素較多,即使室內(nèi)質(zhì)控在控,也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異,因此加大復(fù)查力度是bao證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法。
 
7、表示結(jié)果的常用方法
① 定性測(cè)定。
② 半定量測(cè)定,結(jié)果一般以滴度表示。
③ 定量測(cè)定,即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測(cè)中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
 
以上七種導(dǎo)致變質(zhì)的情況我們只要多加注意,ELISA試劑盒變質(zhì)的原因基本上也就不會(huì)存在了。
 

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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