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ELISA實驗之洗滌要點

點擊次數(shù):12981   發(fā)布時間:2021/8/17 9:51:22

上海恒遠生物技術(shù)員為大家總結(jié)ELISA實驗要點,希望能對大家的實驗有所幫助。

洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步驟,但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來?梢哉f在ELISA操作中,洗滌是主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,不得馬虎。

洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,過程如下:

1.浸泡式
①吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;
②用洗滌液過洗一遍;
③浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1~2分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;
④吸干孔內(nèi)液體,吸干,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾上拍干;
⑤重復(fù)操作③和④,洗滌3~4次。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。


2.流水沖洗式
流水沖洗法初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續(xù)沖洗2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更好,且也簡便、快速。已有實驗表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設(shè)法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。

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原創(chuàng)作者:上海恒遠生物科技有限公司

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