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實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想?做好這幾點(diǎn)你就是ELISA大神

點(diǎn)擊次數(shù):12145   發(fā)布時(shí)間:2024/1/9 10:17:01

Elisa實(shí)驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。ELISA法由于操作簡略,已被廣泛應(yīng)用,咱們就來談?wù)凟LISA試劑盒需把握的關(guān)鍵有哪些?
 
1.在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。一切試劑瓶蓋須蓋緊以避免蒸發(fā)和污染,試劑避免受到微生物的污染,因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致呈現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。
    
2.小心汲取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)刻和溫度。請注意在汲取標(biāo)本/規(guī)范品,酶結(jié)合物或底物時(shí),diyi個(gè)孔與zuihou一個(gè)孔加樣之間的時(shí)刻距離假如太大,將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時(shí)刻,然后明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。
    
3.試劑盒保存:部分試劑保存于-20℃,部分試劑保存于2-8℃,具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn)。
    
4.濃洗滌液會有鹽分出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
 
5.剛敞開的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正,F(xiàn)象,不會對試驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。

6.一切的樣品都應(yīng)管理好,依照規(guī)則的程序處理樣品和檢測設(shè)備。

通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的yi步,下面簡單介紹一下細(xì)胞裂解液樣本及組織勻漿樣本的正確采集、處理方法。

細(xì)胞裂解液:

1.吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用胰酶消化細(xì)胞,加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省略。

2.收集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。

3.加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。

4.將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融幾次,使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達(dá)到裂解的目的。

5.4℃10000×g 離心10min,除去細(xì)胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。

組織勻漿液:

1.將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。

2.將組織塊稱重,記錄后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充分。

3.將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用加入蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量:PBS體積=1:9的比例勻漿,例如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,檢測后計(jì)算樣品濃度時(shí)應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))。

4.吸取勻漿液到離心管,4℃5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。

注意:樣本不含NaN3,因?yàn)镹aN3會抑制HRP的活性,從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。

更多實(shí)驗(yàn)資訊可咨詢我司業(yè)務(wù)員。上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司擁有自己的實(shí)驗(yàn)室,備有業(yè)的技術(shù)研發(fā)團(tuán)隊(duì),對于各種生物試劑,細(xì)胞,血清,ELISA試劑盒的研發(fā)與銷售,實(shí)驗(yàn)提供免費(fèi)代測服務(wù),并提供精湛的技術(shù)服務(wù),如果您有實(shí)驗(yàn)上的問題歡迎來咨詢,為您提供業(yè)的一對一技術(shù)指導(dǎo)。 

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