品牌: 恒遠(yuǎn)生物貨號(hào): HYCC30031
中文名稱: 大鼠胚胎心肌細(xì)胞
規(guī)格: T25
形態(tài)特性: 上皮樣細(xì)胞生長(zhǎng)
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
培養(yǎng)條件:DMEM+10%FBS
傳代方法: 1:2~1:6傳代;2~3天換液1次。
凍存條件: 無血清細(xì)胞凍存液
特征特性:該細(xì)胞由Kimes B和Brandt B從BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細(xì)胞株亞克隆得到;表現(xiàn)出許多骨骼肌的特性。這個(gè)細(xì)胞株中的成肌細(xì)胞能融合形成多核的肌管,并對(duì)乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應(yīng)。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%,融合很快發(fā)生。
一、細(xì)胞收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)某R娹k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察:未超過80%匯合度時(shí),可將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml培養(yǎng)基,放入37℃、孵箱培養(yǎng);超過80%匯合度時(shí),根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶里面的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基),若是5%CO2的培養(yǎng)箱,可用密封培養(yǎng)瓶,擰緊瓶蓋后放入5%CO2培養(yǎng)箱,48H內(nèi)要換液一次。
二、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1.培養(yǎng)皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養(yǎng)液。
2.無菌PBS或無菌生理鹽水洗滌3次(按培養(yǎng)體積加入)。
3.加入適量胰酶消化適當(dāng)時(shí)間(一般胰酶為0.25%;9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶,一次加入1mL胰酶。消化時(shí)間視細(xì)胞類型等多種情況綜合考慮,一般如果是細(xì)胞株,非原代培養(yǎng),消化1-2分鐘足矣)。
4.用槍頭吹打數(shù)十次(視細(xì)胞類型而定。一般細(xì)胞株30-50次吧,耗時(shí)一般2分鐘左右)。
5. 加入適量體積wanquan培養(yǎng)基終止胰酶消化(如果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶,可以加入1mL培養(yǎng)基;現(xiàn)在培養(yǎng)瓶(皿)里有2mL溶液)。
6.現(xiàn)在可以將溶液進(jìn)行分瓶(2mL)。如果是細(xì)胞株,直接均分到兩個(gè)培養(yǎng)瓶(皿)里。如果是原代培養(yǎng),可以根據(jù)消化時(shí)間來對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分離;因此可以將溶液(2mL)都轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶(皿)。
7.將兩個(gè)培養(yǎng)瓶(皿)補(bǔ)足培養(yǎng)基到正常體積(果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶,為5mL培養(yǎng)液)。
8.鏡下觀察。剛剛傳代細(xì)胞還沒貼壁,懸浮在溶液中,呈圓形。一般2h之內(nèi)會(huì)貼壁,如果已經(jīng)貼壁,根據(jù)細(xì)胞類型有不同的形態(tài),但通常都不是圓形。
9.鏡下觀察無誤之后,再放入細(xì)胞培養(yǎng)箱。培養(yǎng)瓶(皿)放入之,可以用消毒酒精先擦一下。
10.傳代之后,第二天細(xì)胞換液一次。當(dāng)然,也可以視情況而定。
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