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RF,人類風(fēng)濕因子ELISA試劑盒原理

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價(jià)格： 4900

型號(hào)：

采購(gòu)度：153 原產(chǎn)地：美洲

發(fā)布時(shí)間：2018/1/2 16:45:39

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：RF,人類風(fēng)濕因子ELISA試劑盒原理用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人類風(fēng)濕因子（RF）的含量。

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標(biāo)簽：RF試劑盒 人類風(fēng)濕因子 ELISA試劑盒原理

詳細(xì)信息

RF,人類風(fēng)濕因子elisa試劑盒原理

本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人類風(fēng)濕因子（RF）的含量。
有效期：6個(gè)月
保存條件：2-8℃
本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人類風(fēng)濕因子（RF）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人類風(fēng)濕因子（RF）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

RF,人類風(fēng)濕因子ELISA試劑盒原理四大特性
1．特異性強(qiáng)：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
2．重復(fù)性好：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
3．穩(wěn)定性高：實(shí)驗(yàn)效果很穩(wěn)定。
4．超靈敏度：*小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，稀釋度和樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

具體操作方法
以雙抗體夾心法為例展示：
1、雙抗體夾心法檢測(cè)抗原
操作步驟如下：
1）將特異性抗體與固相載體結(jié)合，形成固相抗體。洗滌除去尚未結(jié)
合的抗體及一些雜質(zhì)。
2）加入待測(cè)標(biāo)本，保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3）加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。
4）加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過(guò)比色，測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。在臨床檢驗(yàn)中，此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如 HBeAg、HBsAg、hCG 、AFP等。只要獲得針對(duì)受檢抗原的特異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來(lái)源為抗血清，包被和酶標(biāo)所使用的抗體分別取自不同種屬的動(dòng)物。如應(yīng)用單克隆抗體，一般選擇兩個(gè)針對(duì)抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一起保溫反應(yīng)，作一步檢測(cè)。
在一步法測(cè)定中，當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時(shí)，過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成"夾心復(fù)合物"。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過(guò)剩的后帶現(xiàn)象，此時(shí)反應(yīng)后顯色的吸光值（位于抗原過(guò)剩帶上）與標(biāo)準(zhǔn)曲線（位于抗體過(guò)剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測(cè)讀，所得結(jié)果將低于實(shí)際的含量，這種現(xiàn)象被為鉤狀效應(yīng)（hook effect），因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線到達(dá)高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)，反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法試劑測(cè)定標(biāo)本中含量可異常增高的物質(zhì)（例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等）時(shí)，應(yīng)注意可測(cè)范圍的值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。

客戶收集樣品要求
·客戶需提供待檢測(cè)抗體和包被用抗原。
·檢測(cè)的樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清、人和動(dòng)物的血清、血漿。
·樣本收集后應(yīng)立即-20℃保存，若長(zhǎng)期保存應(yīng)-70℃。
·樣本量的要求：若一個(gè)指標(biāo)做復(fù)孔檢測(cè)應(yīng)不少于250ul，做單孔檢測(cè)應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。
·客戶的樣本收集后，立即按要求保存，切忌反復(fù)凍融。外地客戶郵寄需要用干冰運(yùn)輸。郵寄前請(qǐng)與技術(shù)支持溝通確認(rèn)。

Elisa試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（480ng/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書(shū) 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)

標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作流程
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
240ng/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
120ng/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60ng/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30ng/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15ng/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品*終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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更新時(shí)間：2024/12/9 9:53:50

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